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ESTUDIO BACTERIOLÓGICO DEL

LÍQUIDO CEFALORRAQUÍDEO.-
El cerebro y la médula espinal están protegidos por el
cráneo y la columna vertebral. El tejido nervioso está
separado del hueso por medio de tres capas de tejido
conjuntivo: la piamadre, la aracnoides , y la
duramadre.
El líquido cefalorraquídeo (LCR) actúa como mecanismo
de amortiguación de golpes y se localiza en el espacio
subaracnoideo, es decir el espacio que queda entre la
piamadre y la aracnoides. El LCR es segregado por el
plexo coroideo de los ventrículos , sale del sistema
ventricular a través de los agujeros de Luschka y
Magendie y después se distribuye , rodeando al cerebro
y la médula espinal.
Los microorganismos pueden alcanzar el cerebro y la
médula espinal a través de varias vías. El cerebro posee
amplios sistemas vasculares arterial y venoso.
A través de émbolos sépticos, el sistema arterial puede
transportar microorganismos desde zonas de infección
alejadas, como el absceso pulmonar o las válvulas
cardíacas infectadas. Bacterias como Neisseria
meningitidis se introducen en el torrente sanguíneo a
partir de la nasofaringe y alcanzan el cerebro a través
del sistema arterial.
¿Qué es meningitis ?
La meningitis es una infección que causa inflamación de las
membranas que cubren el cerebro y la médula espinal. La
meningitis no bacteriana con frecuencia es denominada
“meningitis aséptica” , mientras que la meningitis bacteriana
se puede denominar “meningitis purulenta”.
Los pacientes con meningitis aguda temprana experimentan:
• Endurecimiento del cuello
• Dolor de cabeza
• Fiebre
• Letargo
En personas mayores debilitadas o en pacientes
inmunosuprimidos la única clave son las alteraciones
no esperadas en el estado mental, se observan grados
de confusión, agitación, desorientación o coma.
La meningitis crónica o subaguda, causada por
tuberculosis o infecciones fúngicas,puede presentar
signos de presión intracraneana o aumentada ,
náuseas, vómitos, y cambios sensoriales, como
desorientación , confusión , cambios de personalidad.
Existen dos signos que ayudan a la identificación de
casos de meningitis como lo son el Signo de Brudzinski y
el signo de Kernig.
VALORES NORMALES DEL LCR
LCR Normal :
Aspecto: Claro como el agua
Linfocitos: 0- 5
Glucosa: 45- 100 mg/dl
Proteínas: 14- 45 mg/dl
MENINGITIS BACTERIANA
Aspecto: Turbio
Neutrófilos segmentados: 500- 20,000
Proteínas: Elevadas
Glucosa: Disminuida

MENINGITIS TUBERCULOSA
Linfocitos: 200- 2000
Glucosa: Disminuida
Proteínas: Disminuidas
MENINGITIS VIRAL
Linfocitos: 200- 2,000
Glucosa: Normal
Proteínas: Levemente elevadas

Las bacterias que tienen mayor importancia en el

líquido cefalorraquídeo son:
GRAMNEGATIVOS:
-Neisseria meningitidis (causa meningitis
meningocócica severa).
Haemophilus influenzae (especialmente en niños
menores de 6 meses a 4 años). Especialmente el tipo b
(presenta el polisacárido capsular tipo B) resiste a la
fagocitosis y a la destrucción celular.
El polisacárido tipo b esta compuesto por un acido
teicoico que contiene ribosa, ribitol (un alcohol de
azúcares de cinco carbonos)y fosfato el cual se
denomina PRP (polirribosil-ribitol-fosfato).
Hib= Haemophilus influenzae tipo b
-Escherichia coli y otras enterobacterias (en pacientes
debilitados, neonatos y post-craneotomía)
--Pseudomonas aeruginosa

GRAMPOSITIVOS :
-Streptococcus pneumoniae
-Staphylococcus aureus
-Streptococcus sp. (grupo B y D en neonatos)
-Streptococcus pyogenes
-Listeria monocytogenes (raras veces)

OTROS MICROORGANISMOS IMPORTANTES:

-Mycobacterium tuberculosis
-Leptospira interrogans
-Treponema pallidum
-Cryptococcus neoformans y Candida albicans (hongos
levaduriformes)
-Virus
En el recién nacido la meningitis se da por una infección
intrauterina o durante el parto vaginal:
Los microorganismos más aislados son:
-Streptococcus agalactiae
-Escherichia coli
Con menor frecuencia : Listeria
monocytogenes,Citrobacter koseri, Pseudomonas sp.
Flavobacterium meningosepticum, Staphylococcus aureus.
Las bacterias anaerobias se recuperan de mayor
frecuencia de los abscesos cerebrales Ejemplos:
Estreptococos anaerobios, Bacteroides, Fusobacterium,
Eubacterium, y Propionibacterium acnes.

MUESTRA:
Por lo general estas muestras son obtenidas por el
médico y deben de obtenerse antes de iniciar
tratamiento con antibióticos y ser colectadas en
recipientes estériles.
Cantidad de muestra: Al menos 6 ml
El LCR por punción lumbar es la muestra más común
recibida en el laboratorio.
Entre los diferentes aspectos del LCR tenemos:

-Turbio
-Purulento
-Sanguinolento
-Filamentoso
-Películas de fibrina
PROCEDIMIENTO
1- Centrifugar la muestra 15 minutos a alta velocidad
(2500- 3000 r.p.m)Decantar asépticamente , tapar,
agitar, y procesar el sedimento.
2- Sembrar una asada del sedimento en cada uno de
estos medios:
-Agar sangre de carnero al 5%
-Agar Chocolate
-MacConkey
-Tioglicolato
-Lowenstein-Jensen
3- Diseminar por estrías en toda la superficie de los
medios sólidos.
4- Realizar frotis y colorearlos por Gram y Ziehl-
Neelsen.

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
Poner especial cuidado en observar las siguientes
morfologías en el frotis Gram:
1- Diplococos gramnegativos (rojos) arriñonados,
dispuestos en parejas como granos de café, morfología
compatible con Neisseria meningitidis .
-
2- Cocobacilos gramnegativos(rojo
pálido)pleomórficos, con escasas formas bacilares
:Morfología compatible con Haemophilus influenzae
3- Bacilos gramnegativos (rojos)de coloración sólida,
no plemórficos, bacilos alargados: Morfología
compatible con Enterobacterias o Pseudomonas.

4- Cocos grampositivos(morados) ovalados, dispuestos

en parejas o cadenas cortas, la cápsula se insinúa
como un halo claro alrededor de las bacterias:
morfología compatible con Streptococcus pneumoniae.
5- Levaduras redondeadas, algunas con gemaciones
laterales, grampositivas, se insinúa la cápsula , hacer
“tinta china” para demostrar la presencia de la levadura
capsulada Cryptococcus neoformans.

6- En el Ziehl-Neelsen, bacilos acido alcohol resistentes

: Mycobacterium tuberculosis.
2-
3
4
h
CARACTERÍSTICAS DE CRECIMIENTO EN LOS DIFERENTES
MEDIOS DE CULTIVO

Neisseria meningitidis en agar sangre

 Neisseria meningitidis en agar chocolate
 Haemophilus influenzae
 PRUEBA DE OXIDACIÓN DE AZÚCARES
Medio de cultivo utilizado: Agar cistina tripticasa
(semisólido)
Al medio base estéril se le adiciona el carbohidrato en
solución con una concentración del 1%. (glucosa,
maltosa y sacarosa).
-Sembrar cada tubo con dos asadas bien cargadas por
tubo, cerrar bien el tapón de rosca e incubar de 48 a 72
horas a 37°C .
Una coloración amarilla indica una reacción positiva.
Neisseria Glucosa + Maltosa - Sacarosa -
gonorrhoeae
Neisseria Glucosa + Maltosa + Sacarosa -
meninigitidis
Las especies de Haemophilus requieren factor X , que
es un grupo de compuestos tetrapirrolicos
termoestables proporcionado por varios pigmentos
que contienen hierro (por ej: hemina, hematina).
La mayoría de las especies de Haemophilus requieren
también el factor V que es un dinucleótido de
nicotinamida adenina.(NAD).
Tanto el factor V y X están presentes en los eritrocitos.
Los Haemophilus dependientes del factor V no suelen
desarrollarse en agar sangre de carnero con eritrocitos
intactos.
El ligero calentamiento durante el agregado de la sangre a la
base de agar fundido cuando se prepara el agar chocolate
produce lisis de eritrocitos y liberación del factor V y factor
X.

PRUEBA DEL SATELITISMO

1- Obtener un cultivo puro en agar chocolate en jarro
húmedo con candela a 36°C.
2- Tomar una asada y estriar en la superficie de una placa de
agar sangre , solo en una dirección.
3- Tomar una asada de Staphylococcus aureus (cultivo puro)
hacer con el asa en argolla una sola estria recta
perpendicular a la estria de Haemophilus.
4- Incubar con jarro con candela 24 horas a 36 °C y
luego examinar.
5- Una reacción positiva se manifiesta por el
crecimiento de pequeñas colonias puntiformes y
traslúcidas que crecen solo muy cerca de la estría de
Staphylococcus aureus.

Los eritrocitos presentes en el agar sangre que rodea la

estría de Staphylococcus aureus proporciona factor X y las
propias células estafilocócicas producen factor V durante su
desarrollo.
El agar sangre de carnero convencional no es apropiado
para el cultivo de especies de Haemophilus que
requiere factor V , debido a que la sangre ovina
contiene enzimas que inactivan el factor V.
La sangre de conejo o de caballo no contienen estas
enzimas.

MÉTODO PARA IDENTIFICAR FACTOR X Y FACTOR V

1- Se siembre una estría en agar tripticasa soya
2- Se colocan los discos o las tiritas de factor X y de
factor V separados por 1 o 2 cm, puede utilizarse un
disco o tira que contiene ambos factores
3- Luego se hace la diferenciación de las especies de
Haemophilus
ESPECIE FACTOR X FACTOR V

Haemophilus + +
influenzae
Haemophilus - +
Parainfluenzae-
Haemophilus + +
haemolyticus
Haemophilus - +
parahaemolyticus

Haemophilus + -
ducreyi
¿Cómo diferenciar Haemophilus influenzae y Haemophilus
haemolyticus?

Se utiliza agar infusión de corazón (AIC) con 5% de sangre

de caballo ( o 5% de sangre de conejo)

Haemophilus influenzae es alfa hemólitico o gamma

hemólitico

Haemophilus haemolyticus es beta hemolítico.

El agar chocolate tiene la desventaja que no puede

determinar las propiedades hemolíticas del Haemophilus
haemolyticus.
OTRAS MORFOLOGÍAS IMPORTANTES

Listeria monocytogenes
Treponema pallidum
CARACTERÍSTICAS DE CRECIMIENTO DE STREPTOCOCCUS
PNEUMONIAE