UNIVERSIDAD

POLITÉCNICA SALESINA

TEMA: Mutaciones Génicas.

INTEGRANTES: Gabriela Albán, Tamara Andrango, Adriana
Mogrovejo, Lisbeth Molina, Leslie Morales, Yahaira Proaño,
Carlos Rocha, Sebastián Salazar.

OCTAVO SEMESTRE G1
 MUTACIONES GENICAS O
PUNTUALES
Son las que alteran
Una mutación génica es
la secuencia de
una alteración
nucleótidos de un solo
permanente de la
gen, por lo que también
secuencia de ADN de la
se
que se compone un gen.
El tamaño de las denominan puntuales.
mutaciones varía, lo que
afecta desde a un solo
componente básico (par
de bases) del ADN hasta
a un gran segmento de
un cromosoma con varios
genes.
 Se pueden producir por:
• Sustitución de pares de bases: por ejemplo, en lugar de un
nucleótido de timina hay uno de citosina.
• Pérdida de nucleótidos.
• Inserción de nuevos nucleótidos.
• Inversión de nucleótidos.
• Translocación de pares de nucleótidos complementarios.
 Errores en la
replicación:
Espontán
Tautometría:
eas transiciones
Mutaciones de
cambio de fase:
Deleciones o
inserciones de
pocos nucleótidos
Lesiones fortuitas
en el ADN:
Despurinización
Desaminación
Daños oxidativos

Elementos
genéticos
transponibl
es:
transposon
es
 Agentes Alquilantes:
EMS :Añade
Radiaciones
Inducidas radicales etilo
ionizantes: α,β,X:
produce transiciones
Alteración de los
NG(nitrosoguanidina
genes.
): Añade radicales
Alteración de los metilo, produce
cromosomas. transiciones.
Efectos fisiológicos. Hidroxilamina (HA):
Produce transiciones
Radiación no Ácido nitroso:
ionizante, luz Produce
ultravioleta desaminaciones C-U;
Tautomería. Agentes
Dímeros
Mutágenos de químicos
timina. intercalentes:
Remplazan una base Proflavina y naranja
en el ADN: análogos de acridina,
de base Bromuro de etidio
Alteran las bases y roducen adiciones o
producen deleciones de un
emparejamientos solo par de
erróneos específicos nucleótidos
 Las mutaciones génicas se pueden
clasificar de dos formas:
 Transposición
Transposones:
Repeticiones dispersas o DNA
moderadamente repetitivo o de
repetición intermedia.

Capacidad de moverse:
Elementos móviles de DNA.
TRANSPOSICIÓN: PROCESO POR
EL CUAL LAS SECUENCIAS SE
COPIAN Y SE INSERTAN EN
UNUEVO SITIO EN EL GENOMA.
 Tipos
Sustituci
ón
Camb
Nucleótidos
io

ADN

Varias
Casos
bases
raros
agrupadas
 Transiciones

Cambio

Purina Purina

Pirimidina Pirimidina
 Transversiones

Cambio

Purina Pirimidina

Pirimidina Purina
 Duplicaciones

Fragme • DNA
nto
Marco de
• Una o Lectura
Copiad varias
o veces

• Cadena
de
Altera aminoáci
dos
 Ejemplo

Soy sal del mar -> Soy sal del sal del mar sal del mar
Cambio del marco de lectura

agrupació Aminoáci
Cambia n Bases dos
eróneos

Ejemplo Soy sal del mar -> Sos ald elm ar

 Mutación cambio de sentido
Este tipo de mutación ocurre cuando se sustituye un nucleótido.
El codón modificado codifica un aminoácido distinto.
Suele dar lugar a un cambio de actividad de la proteína
resultante, lo que puede ser beneficioso o perjudicial.

El codon AAC codifica la

Asn (Asparragina), por
lo que hay un cambio de
aminoácido en el
tripeptido resultante.
 Mutación sin sentido
• Una mutación sin sentido es aquella en que la sustitución de un
nucleótido da lugar a un codón que no codifica ningún aa, el
Codón resultante es la señal de STOP de la traducción. La
proteína resultante es mas corta de lo normal y probablemente
pierda la función que debería realizar

La Proteína
termina
prematurament
e,
queda
incompleta.
 Mutación cambio de fase o cambio
de lectura
• Es un tipo de mutación que implica la inserción o deleción de un
nucleótido en el que el número de pares de bases eliminado no
es divisible por tres. Si una mutación interrumpe este marco de
lectura, entonces toda la secuencia de ADN siguiente a la
mutación se lee incorrectamente.
 EJEMPLO:

Cartografía mediante secuenciación de un

mutante albino de Arabidopsis thaliana
OBJETIVO
S
- Poner a punto un método de
cartografía mediante
secuenciación.
- Obtener una población
cartográfica F2 adecuada para la
realización de un experimento de
cartografía mediante
-secuenciación.
Analizar la secuencia obtenida
mediante el uso de herramientas
bioinformáticas.
RESUMEN
• Albinismo(Cloroplastos)
• Cartografía de secueciación.
• Clonación de un gen de Arabidopsis
thaliana

• Mutación identificado mediante el EMS

• Clasificación de individuos F2(Silvestre
y mutante)

• Secuenciación mediante Illumina Hiseq

2500
• El análisis bioinfomático permitió
identificar la mutación puntual.
MATERIALES Y MÉTODOS (cultivo
de Arabidopsis Thaliana):

Origen del mutante

albino
El mutante albino se aisló con
EMS

Agente alquilante de
mutaciones puntuales(G/C a
A/T)

MATERIALES Y MÉTODOS (cultivo
de Arabidopsis Thaliana) :
Selección de mutantes en F2:
Se obtuvo cruzando
Fenotipo
silvestre( Heterocigóticas
para mutación) + La
especie silvestre Columbia
-0
Se obtuvo F1 (50%
heterocigóticas para
mutación) se
autofecundaron para
obtener F2 (albinas)
87 plantas albinas y 170
plantas silvestres, se aisló
el ADNg y se las plantas se
congelaron a -80°C hasta
purificar el ADN
MATERIALES Y MÉTODOS (cultivo
de Arabidopsis Thaliana) :

Se cultivaron en medio
Medio de cultivo sólido Para
Murashige y Skoog.
Arabidopsis Thaliana

Esterilización con
disolución de estéril,
Esterilización de semillas
incubación 8 min, agua
esteril hasta su siembra

Condiciones para el crecimiento de Cultivo de semilla a 4°C en

Arabidopsis Thaliana cajas Petri y medio MS de 3
a 4 semanas

Cultivo en Recolección de
Cultivo en cajas
maceta (26 días semillas(almacen
Petri (104)
de siembra) adas)
 MATERIALES Y MÉTODOS
(Manipulación de ácidos nucleicos):

Se realizaron dos purificaciones

Purificación de ADN genómico usando un kit (GeneJET Plant
Genomic DNA Purification Mini Kit)

Electroforesis en gel de
Amplificaciones mediante PCR
agarosa

- FastQC
- Utilizó como referencia la
Análisis bioinformático
versión más reciente del genoma
de Arabidopsis thaliana
 Resultados:
- Silvestre + Heterocigotico= F1
- Autofecundación de F1=F2
Fenotipo y modo de herencia - El fenotipo albino reaparecieron en 87 de
de un mutante albino: los 257 estudiados

Obtención de ADN para su - La calidad y cantidad del ADN de las

secuenciación muestras fue evaluada por medio de una
electroforesis en gel de agarosa.
 Resultados:
Procesamiento de secuencias
obtenidas:
Alineamiento de las lecturas
al genoma de referencia:
Se usaron programa informáticos como
PEAR y Trimmomatic que permite detectar
bases de menor calidad y conocer de mejor
manera la secuencia a analizar e incluso
las frecuencias nucleotidica.
Se alinearon en relación a la versión mas
reciente del genoma de Arabidopsis
thaliana.
Se usaron programa informáticos como
PEAR y Trimmomatic.
 Resultados:
Con el fin de identificar posiciones del
genoma que pudieran ser utilizadas
como marcadores
moleculares en la cartografía
Determinación de la posición mediante secuenciación del gen a
del gen mutado usando estudio
cartografía mediante Permitió identificar una única región
secuenciación: del cromosoma 2, que es candidata a
contener el gen cuyas mutaciones
causan albinismo en las plántulas de
Arabidopsis thaliana.
Conclusiones:
- El albinismo en Arabidopsis
Thaliana detiene el desarrollo del
estadio de la planta.
- El albinismo se transmite como
una mutación recesiva.
- La principal ventaja de los
métodos de cartografía mediante
secuenciación es que no
sólo permiten identificar
rápidamente la
localización cromosómica del gen
de interés,
sino que también pueden
conducir a la
identificación de la lesión
causante del
fenotipo mutante.
Gracias
por su
atención