Separacin y Procesos Biotecnolgicos BT56A-IQ742

Introduccin

INTRODUCCION La biotecnologa ha avanzado en los ltimos aos. La oferta de empresas en el rea de ingeniera gentica son generalmente reportados en las pginas financieras, => Esto implica un futuro promisorio para el rea.

Produccin Mundial y Valores de Mercado de Productos Protenicos Tpicos Categora

Nutricional

Fuente de protena Soya

Protena

Produccin Anual (t) > 2107

Precio Aproximado (/t) 130

Harina de soya

Funcional

Soya Suero de Leche

Aislado soya Protena de suero de leche Amilasas Renina Hormona de crecimiento humano Anticuerpos monoclonales

> 105 500

1500 3000 - 6000

Reactivo

Almidn Tejido Animal

600 60 20 kg

15000-30000 108 1010

Salud

Azcar

Suero Bovino

10 kg

3109

Datos 1984

La biotecnologa se refiere a cultivos: Microbianos Clulas animales Plantas Virus Para producir productos tiles para los humanos y que generen ganancias a los inversionistas

ANTECEDENTES

Los primeros productos biotecnolgicos se conocen desde 4000 a.C. cuando se producan pan, queso y yogurt. La definicin de biotecnologa proviene de aproximadamente 100 aos atrs. Se orienta principalmente a productos orgnicos generados por fermentaciones. Acetona (Industria de municiones I Guerra Mundial). Acido ctrico y glutmico. Antibiticos acapar toda la atencin, resultando el producto ms importante
de la biotecnologa, este metabolito secundario produjo grandes beneficios.

Esquema general de la produccin de productos biotecnolgicos

Fermentacin

Cosecha

Disrupcin

Separacin

Desechos

Protenas 60 - 70 g/l

Concentracin Agua

Downstream processing (DSP)

Preacondicionamiento Puri icacin de alta resolucin Pulimento

Caractersticas de la bioseparacin
La separacin de los productos biotecnolgicos resulta relativamente ms difcil que las separaciones en la ingeniera qumica convencional, ya que las molculas que se separar resultan ser extremadamente frgiles y de propiedades fisicoqumicas y bioqumicas muy similares entre ellas. Cualquier empresa que trabaje en la produccin de bioproductos, trabaja con alrededor de 200 compuestos diferentes, mientras que la empresa petroqumica slo trabaja con alrededor de 10 compuestos.

Parmetros tpicos relacionados con DSP

Productos Qumicos Concentracin en el medio (g/l) Contaminacin Tiempo de procesamiento (h) 100 - 120

Antibitico 10 - 40

Enzima 1-5

Protenas Terapeticas 0.1 - 5

Baja 12 - 24

Baja 10 - 24

Baja 6 - 12

Alta 1+

Purificacin Produccin/lote (kg)

Alta Hasta 24000

Alta Hasta 8000

Baja Hasta 400

Muy alta Hasta 3+

DSP por lote Nmero de etapas DSP

Continua 5 - 10

Continua 5-7

Continua 3-6

Usualmente 8 - 14

Composicin de una Corriente de Entrada a DSP

Componente Agua Materia celular Producto Sales inorgnicas Protenas (no producto) Concentracin 900 + g/l 20 - 100 g/l Hasta 120 g/l Trazas hasta 10 g/l Trazas hasta 3 g/l Usualmente removidas con el medio Problema de remocin mayor con productos enzimticos intracelulares Problema de remocin mayor para protenas intracelulares o productos enzimticos Usualmente removidos con el medio, medios residuales De materias primas (por ejemplo, melaza) y los microorganismos mismos Del medio Comentario Mayor costo de separacin para productos de bajo valor Desecho, reciclado o producto

Acidos nucleicos

Trazas hasta 6 g/l (ICP)

Polisacridos Productos orgnicos (color) Slidos orgnicos

1% + (ICP) Trazas en bajo contenido Bajo contenido

Productos Biotecnolgicos de Inters

Biomasa
Levadura Bacterias Hongos

Virus
Adenovirus Retrovirus Adenoasociados Herpes virus Baculo virus

Metabolitos
Alcoholes cidos Antibiticos

Protenas

Desde una suspensin diluda se desea un productos biotecnolgico con:

Procesos de Produccin de Bioproductos Qu se desea?

- Mximo rendimiento
R = Pf/Pi

Pf: Concentracin Producto Final Pi : Concentracin producto inicial Pureza = Pf / 7 P

- Mxima Pureza

7 P: Sumatoria de la concentracin de todos los compuestos presentes

- Producto con propiedades funcionales Cumpliendo las condiciones de:

Costo Razonable, dado que los costos de proceso son muy caros, siendo un porcentaje bastante significativo los equipos.

Diseo del Proceso de recuperacin y purificacin (Downstream processing DSP)

Para el diseo del DSP se debe conocer las respuestas a las siguientes preguntas:

Cul es el precio del producto? Cul es el nivel de produccin? Dnde est el producto en cada etapa? Cules son las propiedades fisicoqumicas y/o bioqumicas que diferencian al producto de sus contaminantes? Cul es el costo de las diferentes alternativas del DSP? cul es la eficiencia de cada etapa?

Proceso de produccin de Biomasa

Crecimiento de la Biomasa (Fermentacin) Separacin de la biomasa del medio de cultivo. Secado y post-tratamientos Almacenamiento de la biomasa

Flows eet ro

cci

iomasa
Gas Out

AFLN-102 / AF-102 Water HSRL-101 / ST-101 Heat Sterilization S-106 Nutrients Ammonia BLND-101 / V-101 Blending FRMN-101 / F-101 S-107 Air Filtration

S-113

Fermentation
Air

STRG-101 / V-102

Storage
S-101

CMPS-101 / G-101 CF Compressor

S-108

AFLN-101 / AF-101 Air Filtration

S-102 S-103 CFGN-101 / DS-101 Disk-Stack Centrifugation RVFL-101 / RVF-101 S-104 Rotary Vacuum Filtration S-105 S-112 FBDNG-101 / FBD-101 Fluid Bed Drying S-109 S-114

S-115 S-116 FILL-101 / FR-101 Filling S-117 BOX-101 / BX-101 Boxing S-118

Proceso de produccin de Virus

Crecimiento de Clulas empaquetadoras Infeccin de Clulas empaquetadoras Crecimiento de Clulas empaquetadoras infectadas Recuperacin de Clulas empaquetadoras Rompimiento de las clulas (segn virus) Separacin de los debris celulares Purificacin de los virus Almacenamiento de los virus

Pr ducci y Purific ci d Ad

virus

Mtodo Tr dicional de Purificacin : CsCl Gradiente + Dilisis

+
Gr diente de CsCl

Centrifuci n

Di lisis

Recuper cin Adenovirus

Adenovirus Puro

Mtodo Propuesto de Purificacin Dos ase acuosas + Cromatografa

PEG

+
Recuperacin Adenovirus

PEG

Sal ATPS

Sal

Adenovirus Puro
Cromatografa de Intercambio Inico

Proceso de produccin de Metabolitos

Crecimiento de la Biomasa (Fermentacin) Separacin del metabolito de la biomasa. Tratamiento y purificacin del metabolito Almacenamiento del metabolito

! 
-

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N/ -

   
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t r Lc / iltr ti -

  
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-

Produccin de cido Ctrico

Water 1

C-Source

LN-

ir iltr ti

  
/


-

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BLND-

  
L/ T-

Bl

t t riliz ti

 

  

Air

 
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LN-

ir iltr ti

  

   
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Gypsum

Sulfuric Acid

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t r Lc / iltr ti -

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t. r st lliz ti N/ -

   

ct

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Ns / r ti

S-127

t r

iltr ti

   &
r Nct r ci it ti

 

 &

Biomass

Lime

Proceso de produccin de protenas

Caldo de Fermentacin Con Clulas

Clulas
Separacin de Clulas

Sin Clulas

Clulas inmovilizadas Clulas retenidas

Rompimiento Clulas Separacin Material Intracelular (Desechos) Precipitacin cidos Nucleicos, Proteasas Tratamiento de cuerpos incluidos

Sobrenadante

Concentracin

Purificacin Alta Resolucin

Permite Altos niveles de pureza Estabilidad del producto

Refinamiento

Efecto de la eficiencia de cada etapa

100.0

80.0

p r ci %R

60.0

40.0

20.0

0.0 0 1 2 Nm 95% 80% 3 Et p s 70% Ef 4 5 6

REGLAS HEURISTICAS PARA EL DISEO DE SISTEMAS DE SEPARACION

Reduccin de la Carga de Separacin

Regla 1 "Mientras sea posible, reducir la carga o flujo msico de separacin por medio de divisin y mezclas de corrientes". Mezcla Divisin

Carga Divisin = 0 ton/da

Carga Mezcla= 0 ton/da

Secuenciamiento de Operaciones
Heurstica: Siendo todos los compuestos similares, intente separar los ms abundantes primero.

Ejemplo 2: Se tiene un caldo de protenas que contiene un 50% de lisozima, 20% ovalbmina, 15% conalbmina, etc. Cul separara primero?

"Siendo el resto igual, desechar aquellas separaciones que involucren especies que no estn normalmente presentes en el proceso. Sin embargo, si se adiciona una especie extraa, se debe remover inmediatamente despus de ser utilizada".

Remover primero las especies corrosivas