Badanie polimorfizmu sekwencji genu demetylazy 14-lanosterolowej oraz zdolnoci wytwarzania czynnikw wirulencji w populacji krajowych, klinicznych izolatw

drody z rodzaju Candida.

Wykonawca: Magdalena Otarzewska Promotor: dr.in Piotr Szweda

Candida albicans
Patogenny, dimorficzny grzyb (wystpuje w postaci pseudostrzpek i blastospor) Rozmnaanie pczkowanie Wywouje zakaenia oportunistyczne Komensal organizmu ludzkiego Charakterystyczny element morfologicznychlamydospory Ronie na staym podou Sabouarda

Chorobotwrczod
Wytwarza substancj podobn do endotoksyny Zdolnod wytwarzania grzybni wskazuje na chorobotwrczod Innymi istotnymi czynnikami wirulencji s enzymy proteolityczne, lipolityczne i hemolizyny Grony dla ludzi z obniona odpornoci Inwazja- wszystkie tkanki, narzdy, a nawet cae ukady organizmu.

Grzybice ukadowe
Czynniki wpywajce na wzrost czstoci wystpowania zakaeo grzybiczych: Antybiotykoterapia Dugoterminowa terapia cytostatykami Chemoterapia Pojawianie si nowych szczepw opornych na dziaanie wielu lekw (MDR).

Leki stosowane w terapii przeciwgrzybowej

Antybiotyki Syntetyczne i psyntetyczne leki przeciwgrzybicze

Azole
Wzgldnie bezpieczne i atwe w aplikacji Dziaanie grzybostatyczne wobec Candida i grzybobjcze wobec pleni Dziaaj na bon komrkow grzyba Zakcenie procesu biosyntezy ergosterolu Efekt dziaania: ograniczenie aktywnoci demetylazy 14-lanosterolowej

Podzia azoli
Pochodne imidazolowe- Pochodne imidazolu pierwszej generacji to: klotrimazol, mikonazol, ekonazol, izokonazol, butokonazol, bifonazol, oksykonazol i tiokonazol, za drugiej generacji ketokonazol. Pochodne triazolowe-Pochodne triazolu dziel si na leki pierwszej generacji, do ktrej nale itrakonazol, flukonazol oraz tetrakonazol i leki drugiej generacji, do ktrych zaliczamy worykonazol, posakonazol oraz rewukonazol.

Mechanizm dziaania azoli

Mechanizmy opornoci
Nadekspresja transporterw lekowych ABC i MFS, ktre posiadaj zdolnod usuwania wypompowywania lekw z komrek grzyba Nadekspresj genu ERG11, kodujcego enzym docelowy 14- demetylaz Mutacje punktowe w genie ERG11, ktre prowadz do zmniejszenia powinowactwa 14-demetylazy do lekw przeciwgrzybiczych

Cel pracy
Okrelenie ktry z mechanizmw opornoci na leki z grupy azoli jest najbardziej rozpowszechniony wrd krajowych klinicznych izolatw Candida albicans. W ramach pracy Dyplomowej badaniami objto grup 20 szczepw otrzymanych z Centrum Zdrowia Dziecka. Porwnywany jest take potencja wirulencji izolatw.

Identyfikacja gatunkowa
Na pytkach ChromAgar

Opornod na flukonazol

Testy fenotypowe
Testy na wytwarzanie: fosfolipaz, proteaz, esteraz oraz na wytwarzanie grzybni. Testy przeprowadzono na odpowiednich poywkach.

Proteazy

Esterazy

Fosfolipazy

Grzybnia

Amplifikacja genu ERG11

Wyizolowano DNA za pomoc zestawu Genomic Mini AX YEAST Stosowane poliomerazy: Polimeraza Taq A&A Biotechnology Polimeraza Walk- A&A Biotechnology His II Mega- DNA Gdaosk Polimeraza Taq- Fermentas

Dalsze plany:
Amplifikacja genu ERG 11 Poznanie jego sekwencji oraz porwnanie z sekwencj wzorcow w celu znalezienia mutacji odpowiedzialnych za opornodna leki z grupy azoli Amplifikacja genw kodujcych pompy wielolekowe

Bibliografia
White C. T, Holleman S., Dy F., Mirels L.F, Stevens D.A (2002) Resistance Mechanism in Clinical Isolates of Candida albicans. Antimicrobial Agents and Chemotherapy June p.1704-1713 Morio F., Loge C., Besse B., Hennequin C., Le Pape P. (2010)Screening for amino acids substitution in the Candida albicans Erg11 protein of azole-suspectible and azole-resistant clinical isolates: new substitutions and a review of the literature. Diagnostic Microbiology and Infectious Disease 66: 373-384 Balkis Maker M., Leidich Steven D., Mukherjee Pranab K., Ghannoum Mahmoud A., Mechanisms of Fungal Resistance, 2002, str. 1028-1029. DworeckaKaszak Boena, Genetyczne podstawy opornoci wielolekowej u grzybw, Mikologia lekarska 2010, 17 (2): 73-78 Gulshan Kailash, Moye-Rowley Scott W., Multidrug Resistance in Fungi. Eukariotic Cell, 2007, str. 1933-1942