AVANCES DE LA BIOLOGIA

Mg. Mev Dominguez Valentin

Laboratrio de Biologia Molecular Centro de Tratamiento e Investigacin Hospital do Cncer A.C. Camargo, So Paulo- Brasil

Formas de Vida

VIDA
Divisin / Proliferacin Celular Diferenciacin Celular Apoptosis

La clula

El ncleo
Citoplasma Ncleo Nucleolo Membrana nuclear Poros nucleares Membrana citoplasmtica Cromosoma Cromatina

El cromosoma

DOGMA CENTRAL DE LA BIOLOGIA MOLECULAR

5

The basic genetic processes

DNA replication DNA repair
Genetic recombination

DNA

3 5
DNA transcription RNA synthesis RNA

DNA

RNA
N2H

codons
translation

Protein synthesis
PROTEIN
COOH

Protena

amino acids

Manipulacin de la molcula de DNA

Estructura do DNA Watson e Crick (1953) ANLISIS MOLECULAR

Indstria de Informacin

La Fbrica El Manual de Instrucciones El Dogma Central

La Clula DNA

DNA-RNA- Proteinas

Los Operrios
Errores de Programacin

Proteinas
Enfermedades

BIOLOGIA MOLECULAR
Retrata el estudio de las clulas y molculas

En particular: genoma de los organismos

Conjunto de informaciones genticas

Codificadas en molculas de DNA

1953- IDENTIFICACION DE ESTRUTURA DE DNA

1970- NUEVAS TECNOLOGIAS (aislamiento y purificacion de genes especficos) 1983- TCNICA DE PCR (reaccin en cadena de la polimerasa) 1989- revista Science eligi a PCR como:

mayor desarrollo cientfico

DNA unidad bsica: nucleotdeos

Una base nitrogenada (anillp heterocclico de tomos de carbono y nitrogeno)

Una pentosa (azcar con cinco carbonos)

Un grupo fosfato (molcula con um tomo de fsforo cercado por 4 oxigenos)

DNA X RNA

PCR REACCIN EN CADENA DE LA POLIMERASA

Kary Mullis 1987

(gel de agarose) Separacin de fragmentos de DNA por tamao (pb)

Agarose diluda en tampn

Dejar la agarosa solidificar en una forma

Aplicacin de las muestras (productos de PCR) en el gel polimerizado de agarose

Cuba de eletroforesis - horizontal

Cuba de eletroforesis - vertical

PCR requiere poco DNA inicial alta sensibilidad extremamente especfica

DIAGNSTICO PR-NATAL

DNA PROVENIENTE DE UMA CLULA

DETECCIN CON BAJA CARGA DEL PATGENO

PROCEDIMENTOS PARA DIAGNSTICO MOLECULAR

Colecta muestra

de

laa

(sangre, fluido amintico, vellosidad corinica, orina)

Extraccin de DNA

Southern blot PCR Eletroforese

MUTACIONES GENICAS

SUSCEPTIBILIDAD A ENFERMEDADES (cncer)

Consejo gentico

Intervencin teraputica

Grande conquista na rea da sade

Prcticas preventivas

Identificar indivduo de alto riesgo

CARIOTIPO ESPECTRAL

Perfil gentico de um proceso patolgico

ENFERMEDAD CON MANIFESTACIN TARDIA

Enfermedad de Alzheimer

GEN 1

GEN 3

Transformacin Maligna
GEN 4

GEN 2 GEN 5

Prognstico Tratamiento Identificacin pr-sintomtica

GRAN AVANCE: Elucidacin de las vias que participan de la transformacin maligna y demas procesos patolgicos

Tejido NORMAL

Tejido CANCEROSO

EXPRESIN GNICA DIFERENCIAL

Entendimento del PROCESO PATOLGICO

Cerca de 40 mil diferentes cpias de genes ordenados en una matriz de menos de un centmetro quadrado
Cmo es realizado? El robot toma una alcuota de cada conjunto de molculas de cDNA Organizacin en una lmina de vidrio

Asi, el "chipes preparado

Extraccin de mRNA Tejido normal/tejido canceroso (sondas)

Sntesis de cDNA Marcacin de las molculas con fluorocromo (las sondas de cada clula reciben marcacin con fluorescencia de color diferente)

Las sondas reaccionan con los cDNAs-alvo del ARRAY.

Cantidad de sonda = cantidad de RNAm sintetizado = nvel de la expresin gnica

PROTENAS

Estreptavidina Biotina

Peroxidase
luminol

Anticuerpo primrio

Anticuerpo secundrio

Exponer la membrana al filme

Protenas

MEMBRANA

Cules son las protenas y sus interacciones Estimativa: 100.000-1.500.000 protenas diferentes en una clula
Indivduos normais Indivduos con patologia

Comparacin de las protenas Medicamento para bloquear Atividad patolgica

PROMESAS del PGH na medicina

Diagnstico pr-sintomtico Terapia genica Terapia farmacolgica

DIAGNSTICO PRSINTOMTICO Diagnstico antes de las manifestaciones clnicas Identificacin de portadores asintomticos

Enfermedades sin tratamento (Enfermedad de Huntington)

Enfermedades pasibles de prevencin (hipertensin arterial)

TERAPIA GENICA
Transferencia teraputica de genes para clulas/tejidos alvo

tipo medicamento dosis del medicamento

mejores resultados disminucin de los efectos secundrios

PERFIL GENTICO del paciente

En 15 aos Tratamientos genticos para enfermedades mentales Terapia gentica intra-uterina de embriones

En 25 aos
Anlise completa del genoma de una

persona ser un examen comn

En 45 aos
Terapia gentica estar disponible para la
mayoria de las enfermedades. Aumento de la expectativa media de vida del hombre

Es correcto terminar con la vida de un feto por presentar defectos genticos? Es una invasin de privacidad?
El indivduo no ser discriminado?

PROBLEMAS TICOS
Quin tendr acceso a esa tecnologia?

La informacin ser confidencial?

Ser requisito para Seguro Salud?

MUCHAS GRACIAS!!!
mev_dv@yahoo.com